Čistilna oprema za čiščenje oligo

1. Čiščenje z gelsko elektroforezo in kromatografijo
Za čiščenje uporabite kromatografijo z elektroforezo v denaturiranem poliakrilamidnem gelu.Denaturacijsko sredstvo je običajno 4M formamid ali 7M sečnina, koncentracija akrilamida je med 5-15%, delež metakrilamida pa je večinoma med 2-10%.
Po elektroforezi je treba določiti položaj traku nukleinske kisline pod obsevanjem ultravijolične svetlobe, gel, ki vsebuje ciljno nukleinsko kislino, odrežemo, nukleinsko kislino zdrobimo in izlužimo, nato pa raztopino za izluževanje koncentriramo, razsolimo, kvantificirati in liofilizirati.

2. DMT-On, HPLC čiščenje
Med sintezo izberite način DMT-On, surovi produkt je bil centrifugiran in koncentriran pri sobni temperaturi, da se po aminolizi odstrani presežek amoniaka.
Ločevanje smo izvedli z uporabo kolone C18 z acetonitrilom in 10% trietilamin-ocetno kislino (TEAA) kot eluentom.Ko je elucija končana, jo koncentriramo in nato DMT skupino odstranimo s trifluoroocetno kislino.Po nevtralizaciji se nekaj soli in majhnih molekul odstrani skozi odrezano cev in končno razsoli.

S to metodo lahko pridobimo izdelek z večjo čistostjo, vendar je potrebno paziti na pojav depurinacije.

3. DMT-izklop, HPLC čiščenje
Med sintezo izberite DMT-Off, surovi produkt pa centrifugirajte in koncentrirajte pri sobni temperaturi, da odstranite presežek amoniaka po amonolizi.
Ločevanje smo izvedli z uporabo kolone C18 z acetonitrilom in 10% trietilamin-ocetno kislino v vodi kot eluentom.Ko je ločevanje končano in kvantificirano, se alikvoti liofilizirajo.

Ta metoda zahteva skrbno prilagajanje pogojev ločevanja in lahko pridobi tudi relativno čiste ciljne molekule.