Pri tipični sintezi DNK, RNK in nenaravnih nukleinskih kislin ima korak odstranjevanja zaščite in spajanja ključno vlogo.
Stopnja deprotekcije je odstranitev skupine DMT na trdnem nosilcu ali 5' hidroksilne skupine na prejšnjem nukleozidu z organsko kislino in izpostavitev hidroksilne skupine za naslednjo stopnjo spajanja.3 % trikloroocetna kislina v diklorometanu ali toluenu se večinoma uporablja za izvedbo koraka deprotekcije.Koncentracija trikloroocetne kisline in čas deprotekcije (čas deblokiranja) prevladujeta glede čistosti končnih produktov.Nizka koncentracija in nezadosten čas deblokiranja pustita nereagirano skupino DMT, kar zmanjša izkoristek in poveča neželene nečistoče.Dolg čas deblokiranja lahko povzroči depurin sintetiziranih zaporedij, kar tvori nepričakovane nečistoče.
Korak spajanja je občutljiv na vsebnost vode v topilih in vlago v zraku.Koncentracija vode v sintezi mora biti manjša od 40 ppm, bolje manj kot 25 ppm.Da bi ohranili stanje brezvodne sinteze, je treba sintezo nukleinskih kislin izvajati v okolju z nizko vlažnostjo, zato naši stranki priporočamo uporaboOprema za raztopljene amidite, ki lahko raztopi fosforamidit v prahu ali olju v brezvodnem acetonitrilu, da prepreči stik z zrakom.
Ker je raztapljanje fosforamiditov boljše v razmerah brez vode in molekularne pasti za adsorpcijo sledi vode v reagentih in amiditu, je treba pripravitiMolekularne pasti.Priporočamo 2 g sita za 50-250 ml reagentne steklenice, 5 g za 250-500 ml reagentne steklenice, 10 g za 500-1000 ml reagentne steklenice in 20 g za 1000-2000 ml reagentne steklenice.
Raztapljanje fosforamiditov je treba izvesti v inertni atmosferi, zamenjavo aktivatorskih reagentov in acetonitrila pa je treba pravočasno zaključiti.Reagente za zapiranje in oksidacijo je treba uporabiti čim prej, odprti reagenti imajo krajši rok trajanja in manjšo aktivnost med sintezo.
Čas objave: 9. avgusta 2022