Osnovni princip sinteze DNK

Kemična sinteza DNK temelji na strategiji sinteze v trdni fazi in fosforamiditni kemiji.Za razliko od biološke sinteze DNK je material pri kemični sintezi DNK DMT (4, 4-dimetoksitritil) in deoksiriboksizid, modificiran s fosforamiditom, kot je prikazano na sliki 1. Sinteza DNK se izvaja na trdnem nosilcu (ponudimo lahko različneOligosintezna kolona), tj CPG (steklo s kontroliranimi porami) in PS (polistiren), celotna sinteza pa poteka naSintetizator DNA/RNA, ki je naša glavna oprema, ima različne modele, kot so: enokanalni sintetizator HY, HY-12, HY-192 itd., smer sinteze je od 3' do 5', nukleotid pa se v trdno podporo uvede prek enega sintezni cikel.Običajni cikel sinteze vsebuje štiri korake, odstranitev zaščite, spajanje, zapiranje in oksidacijo (slika 2).Deprotekcija je nastavljena tako, da odstrani skupino DMT na trdnem nosilcu ali 5' hidroksilno skupino na prejšnjem nukleozidu, 3% trikloroocetna kislina v diklorometanu se uporablja kot reagent za deprotekcijo.Nato smo s fosforamiditom modificiranim deoksiriboksizidom pustili izpostaviti hidroksilno skupino s pomočjo aktivatorja, tj. 5-etiltiotetrazola ali 4,5-dicianoimidazola, pri čemer je nastal fosfitriester (III), in izvedli korak pripajanja.Korak omejevanja se izvede, da blokira nereagirano hidroksilno skupino med korakom spajanja, da se čim bolj zmanjša tvorba neželenih okvarjenih zaporedij.Končno se nestabilni fosfortriester (III) oksidira v kemično stabilen fosfortriester (V) z jodom kot oksidantom v prisotnosti piridina.

Sintetizirano DNK je mogoče odcepiti od trdne podpore z aminolizo, 2-cianoetil zaščitena skupina na fosfortriestru in amid na nukleobazi se odcepita istočasno, Sintezne plošče in Sintezne kolone v stojalih so postavljene neposredno v reakcijsko komoro odOprema za odstranjevanje zaščite.Surovo DNK lahko pripravimo s HPLC, elektroforezo in OPC na zahtevo, lahko vam tudi zagotovimoOprema za čiščenjeza naknadno obdelavo.